| 摘要：目的:探讨依托咪酯对缺氧/复氧（H/R）诱导的心肌细胞损伤的影响及其对环状RNA-CCND1（circ-CCND1）/微小RNA-214-5p（miR-214-5p）分子轴的调控作用。方法:体外培养大鼠心肌细胞H9C2,使用H/R处理细胞建立细胞损伤模型,分别加入不同浓度的依托咪酯处理H9C2细胞,分别将si-NC、si-circ-CCND1转染至H9C2细胞进行H/R处理,后续实验中分别将pcDNA、pcDNA-circ-CCND1转染至H9C2细胞,使用依托咪酯处理后进行H/R处理;根据试剂盒说明书检测超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）的活性与乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）的水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;采用qRT-PCR检测circ-CCND1、miR-214-5p的表达量;双荧光素酶报告实验检测circ-CCND1、miR-214-5p的靶向关系;Western blot法检测微管相关蛋白轻链3II（LC3-Ⅱ）、微管相关蛋白轻链3Ⅰ（LC3-Ⅰ）、自噬相关基因Beclin-1蛋白表达量并计算LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值。结果:H/R诱导的H9C2细胞中LDH、MDA的水平与凋亡率及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Beclin-1蛋白水平显著升高（P<0.05）,SOD、CAT的活性降低（P<0.05）,circ-CCND1的表达水平显著升高（P<0.05）,miR-214-5p的表达水平显著降低（P<0.05）,而依托咪酯能够明显逆转H/R对H9C2细胞氧化应激、凋亡、自噬及circ-CCND1、miR-214-5p表达量的影响（P<0.05）;circ-CCND1可靶向结合miR-214-5p;转染si-circ-CCND1可明显降低LDH、MDA的水平与凋亡率及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Beclin-1蛋白水平（P<0.05）,提高SOD、CAT的活性（P<0.05）;转染pcDNA-circ-CCND1可明显降低依托咪酯对H/R诱导的H9C2细胞氧化应激、凋亡及自噬的作用（P<0.05）。结论:依托咪酯可通过下调circ-CCND1表达、上调miR-214-5p表达从而抑制H/R诱导的心肌细胞氧化应激、凋亡及自噬,进而减轻心肌细胞损伤。 |
