| 摘要：目的:探讨甘草总黄酮通过调控丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞(HGF)炎症反应的抑制作用。方法:体外分离培养原代HGF,以5μg·ml-1?LPS处理后，采用CCK-8实验检测0,1.5,3,6,12,24μg·ml-1甘草总黄酮对HGF细胞活力的影响，筛选出甘草总黄酮适合的剂量和作用时间。体外培养原代HGF,随机分为对照组(不进行任何药物处理)、LPS组(5μg·ml-1)、甘草总黄酮低剂量(6μg·ml-1)+LPS(5μg·ml-1)组、甘草总黄酮高剂量(12μg·ml-1)+LPS(5μg·ml-1)组、甘草总黄酮高剂量(12μg·ml-1)+LPS(5μg·ml-1)+C16-PAF(MAPK激活剂，4μmol·L-1)组。采用CCK-8实验、划痕实验分别检测各组细胞活力和迁移率；酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒检测各组细胞炎性因子白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、环氧合酶-2(COX-2)释放水平；免疫印迹法检测各组细胞IL-6、IL-8、COX-2、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、趋化因子2(CCL2)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-8(MMP-8)及MAPK/NF-κB通路相关蛋白表达。结果:甘草总黄酮可提高LPS诱导的HGF细胞活力，与药物剂量及作用时间呈正相关。与对照组相比，LPS组细胞活力和迁移率显著降低(P<0.05),IL-6、IL-8及COX-2的释放量、IL-6、IL-8、COX-2、ICAM-1、CCL2、MMP-2及MMP-8蛋白表达、p-细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)/ERK1/2、p-c-Jun N-末端激酶(JNK)/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65及肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达显著升高(P<0.05)。与LPS组相比，甘草总黄酮低、高剂量+LPS组细胞活力和迁移率均显著升高(P<0.05),IL-6、IL-8及COX-2的释放量、IL-6、IL-8、COX-2、ICAM-1、CCL2、MMP-2及MMP-8蛋白表达、p-ERK1/2/ERK1/2、p-JNK/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65及TNF-α表达均显著降低(P<0.05),且甘草总黄酮低、高剂量组间差异有统计学意义(P<0.05)。与甘草总黄酮高剂量+LPS组相比，甘草总黄酮高剂量+LPS+C16-PAF组细胞活力和迁移率显著降低(P<0.05),IL-6、IL-8及COX-2的释放量、IL-6、IL-8、COX-2、ICAM-1、CCL2、MMP-2及MMP-8蛋白表达、p-ERK1/2/ERK1/2、p-JNK/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65及TNF-α显著升高(P<0.05)。结论:甘草总黄酮可通过抑制MAPK/NF-κB信号通路而降低炎性因子表达，并下调ICAM-1、CCL2、MMP-2、MMP-8蛋白表达，抑制LPS诱导的炎症，促使HGF生长和迁移。 |
