| 摘要：目的:探讨脯氨酸4-羟化酶β亚基(P4HB)蛋白在千层纸素A抗肝癌血管生成中的作用及其可能的机制。方法:Western blot检测6株人肝癌细胞系HCCLM3、Huh7、HepG2、MHCC97-L、Bel-7402及SMMC-7721中P4HB的蛋白表达。MTS试剂盒检测受试化合物对SMMC-7721细胞体外增殖的影响；LDH检测受试化合物对SMMC-7721细胞毒性影响；Western blot法检测受试化合物对SMMC-7721细胞中P4HB蛋白表达的影响；构建P4HB干扰质粒并转染SMMC-7721细胞，Western blot检测干扰转染效率；采用小管形成实验研究干扰P4HB对SMMC-7721细胞血管生成的影响；采用Western blot检测干扰P4HB对SMMC-7721细胞中hedgehog (Hh)信号相关蛋白Patched、Smo及Hhip蛋白表达影响；采用ELISA试剂盒检测激动Hh信号对P4HB蛋白调控SMMC-7721细胞血管内皮生长因子(VEGF)及血小板衍生生长因子(PDGF)分泌影响。结果:6株细胞中，SMMC-7721细胞表达P4HB蛋白最高。与对照组相比，千层纸素A体外可显著抑制抑制SMMC-7721细胞的增殖(P<0.05),并在100μmol·L-1以上时对细胞显示毒性作用(P<0.05)。与对照组相比，千层纸素A可显著抑制SMMC-7721细胞中P4HB蛋白表达(P<0.05);与对照干扰组相比，P4HB干扰质粒可显著抑制SMMC-7721细胞中P4HB蛋白表达(P<0.05),表明质粒构建成功；与对照干扰组相比，干扰P4HB可抑制SMMC-7721细胞的血管生成(P<0.05),降低SMMC-7721细胞Patched及Smo的蛋白表达(P<0.05),并升高Hhip蛋白表达(P<0.05)。此外，与对照组相比，千层纸素A亦能够抑制SMMC-7721细胞Patched及Smo的蛋白表达(P<0.05),并增加Hhip蛋白表达(P<0.05)。与P4HB干扰组相比，激动Hh信号可减弱P4HB干扰所致的细胞VEGF及PDGF分泌下降的作用(P<0.05)。结论:千层纸素A能够通过抑制P4HB介导的hedgehog信号抑制肝癌细胞的血管生成。千层纸素A是抗肝癌血管生成疗法的潜在化合物。 |
